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　　Calu-3人肺腺癌细胞(胸水)是从一名25岁的白人男性肺腺癌患者的胸水中分离建系的；该患者曾使用过环磷酰胺、博来霉素、阿霉素进行治疗。Calu-3细胞接种至裸鼠可成瘤；Calu-3细胞亦可作转染宿主。

　　种属：人

　　年龄（性别）男；25岁

　　组织来源肺；转移灶；胸水腺癌

　　生长特性：贴壁

　　细胞形态：上皮细胞样

　　生长培养基：MEM＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃Calu-3细胞是从一名25岁的白人男性肺腺癌患者的胸水中分离建系的；该患者曾使用过环磷酰胺、博来霉素、阿霉素进行治疗。Calu-3细胞接种至裸鼠可成瘤；Calu-3细胞亦可作转染宿主。

　　Calu-3人肺腺癌细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）Calu-3人肺腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

　　Calu-3人肺腺癌细胞注意事项：

　　1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

　　2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

　　3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

　　4.悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。

　　贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。

　　5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。